抗生素相信對于大家來說一點(diǎn)都不陌生，作為一種消炎藥物，它被廣泛應(yīng)用于各種病痛的治療當(dāng)中，但濫用它的危害也是顯而易見的；而且近年來除了歐美國家在地表水當(dāng)中發(fā)現(xiàn)抗生素超標(biāo)外，我國的一些科研檢測人員在對長江和黃河進(jìn)行抽樣檢測時也發(fā)現(xiàn)了抗生素高含量的現(xiàn)象。而這些抗生素絕大部分是由醫(yī)療廢水、生活污水、水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水、動物用藥、飼料等，排放進(jìn)地表水中，而后一部分再經(jīng)飲用水進(jìn)入到人體當(dāng)中。而這也是近年來出臺多項(xiàng)水中抗生素類檢測標(biāo)準(zhǔn)的原因。今天我們就來講一下液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜檢測水中抗生素的方法。

  此方法檢測原理是將采集到的水質(zhì)樣品經(jīng)0.22pm濾膜過濾，與乙腈1:1混合后進(jìn)樣，用液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀測定。根據(jù)保留時間和特征離子定性，外標(biāo)法定量。

檢測所用試劑

1.乙腈：色譜純。

2.甲酸：色譜純。

3.50%乙腈溶液：取50mL乙腈，用水稀釋至100mL。

4.0.1%甲酸水溶液：取lmL甲酸，用水稀釋至1000mL。

5.標(biāo)準(zhǔn)品：紅霉素,含量≥97.0%；青霉素,含量≥98.0%。

6.紅霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為100ug/mL。準(zhǔn)確稱取10.0mg紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解并稀釋成濃度為100ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；也可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，在-10℃以下冷凍、避光保存；或參照制造商的產(chǎn)品說明保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫并搖勻。

7.青霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為100ug/mL。準(zhǔn)確稱取10.0mg青霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用50%乙腈溶液溶解并稀釋成濃度為100ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；也可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，在-10℃以下冷凍、避光保存；或參照制造商的產(chǎn)品說明保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫并搖勻。

8.紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液:濃度為10.0ug/mL。分別取紅霉素和青霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.00mL于10.0mL容量瓶中，用50%乙腈溶液定容，可得到紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

9.濾膜：一次性針頭式過濾器，0.22um,混合纖維素酯（MCE）材質(zhì)。

10.一次性聚丙烯針管。

檢測所用儀器

1.液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）,具備梯度洗脫和多反應(yīng)監(jiān)測功能。

2.分析天平：感量為0.0001g。

3.樣品瓶：100mL磨口或帶聚四氟乙烯內(nèi)襯墊瓶蓋的棕色玻璃瓶。

4.微量注射器或移液器：10ul、50ul、100ul、500ul、1.0mL。

水樣的采集和制備

  我們可以按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行水質(zhì)樣品的釆集。水樣釆集時應(yīng)充滿樣品瓶，不留空隙。在4℃以下冷藏、避光保存。2d內(nèi)完成分析。

水樣的制備

  水樣需充分混勻，取約10mL樣品經(jīng)0.22um濾膜過濾，棄去至少1mL初濾液后，準(zhǔn)確移取500uL過濾后的樣品于棕色進(jìn)樣瓶中，再加入500uL乙腈，混勻后待測。

空白水樣的制備

  用實(shí)驗(yàn)室一級純水代替水樣，然后按照水樣的制備步驟對空白水樣進(jìn)行操作。

檢測步驟

液相色譜條件

  色譜柱為C18（100mmX2.1mm,粒徑1.7um），或相當(dāng)者；流動相為A：乙腈，B：0.1%甲酸水溶液；流速為0.25mL/min；柱溫為30°℃；進(jìn)樣體積為10uL；流動相梯度洗脫程序可以參考相應(yīng)圖表。

質(zhì)譜條件

  離子源為電噴霧離子源（ESI）;掃描方式為正離子模式；監(jiān)測方式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；去溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮?dú)饣蚱渌线m氣體；

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

  移取適量的紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，用50%乙腈溶液稀釋，配制至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液中紅霉素和青霉素的參考濃度質(zhì)量濃度分別為0.100ug/L、0.200ug/L、0.500ug/L、1.00ug/L、2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L和20.0ug/L,移取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液于棕色進(jìn)樣瓶中，待測。按照規(guī)定中的儀器條件，由低濃度到高濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測定。以目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度（ug/L）為橫坐標(biāo)，以其對應(yīng)的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

水樣的測定

  將準(zhǔn)備好的水樣按照規(guī)定中的儀器條件進(jìn)行測定。

  定性分析可以在同一色譜/質(zhì)譜條件下對標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣進(jìn)行測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖的保留時間與試樣的保留時間、標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子與試樣各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時間的相對偏差不大于5%。試樣中目標(biāo)化合物定性子離子的相對豐度(Ksam）。與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度（Kskd）進(jìn)行比較,相對豐度偏差不超過相關(guān)圖表規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應(yīng)的目標(biāo)化合物。

  而水樣中紅霉素、青霉素的質(zhì)量濃度可以直接按照公式進(jìn)行計算得出。